Karakterisasi dan Identifikasi Tirosin Kinase dengan SDS- PAGE

Karakterisasi dan Identifikasi Tirosin Kinase dengan SDS- PAGE 

Identifikasi tirosin kinase dengan SDS-PAGE bertujuan untuk mengetahui gambaran beberapa pita protein.

Tahapan kerjanya adalah sebagai berikut: masukkan separating gel ke dalam alat Elektroforesis melalui

dinding sampai di bawah batas atas. Selanjutnya tambahkan akuades sampai batas atas supaya separating

gel rata. Selanjutnya akuades diserap dengan tisue dan tambahkan stacking gel melewati dinding sampai

penuh, masukkan comb (pencetak sumuran dari gel) dan ditunggu terbentuk gel. Selanjutnya comb diambil

dan dibersihkan dari sisa gel dengan tisue. Cetakan gel yang sudah jadi dipindahkan dan dimasukkan ke

dalam chamber, kemudian direndam dalam running buffer. Selanjutnya diletakkan cetakan penuntun sampel

yang akan di running. Sampel penelitian berupa isolat protein membran spermatozoa sapi sebanyak 35 ml

dimasukkan ke dalam lubang cetakan dengan tip 200 ml. Langkah berikutnya chamber dihubungkan dengan

alat Biorad, power supply dinyalakan dengan kekuatan 130 V, 30 mA selama 1,5 jam. Jika reaksi gel

sudah sampai bawah kemudian dimatikan dan plate dibuka dan dipisahkan. Selanjutnya hasilnya berupa

lembaran berbentuk gel diwarnai dengan coomasie blue dan di sacker (digoyang) selama 30 menit.

Kemudian dikeluarkan dan ditambahkan dengan cairan destaining dan di sacker lagi selama 30 menit. Jika

cairan sudah terlihat biru diganti dengan cairan destaining yang baru begitu seterusnya sampai cairan

berwarna putih dan hasilnya berupa beberapa pita protein. Berat molekul akan dapat terlihat pada cetakan

gel SDS-PAGE (Rantam, 2003).